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淺析PCR儀設計
發布日期:2022/10/29 9:36:17
分子診斷是幫助醫護人員進行診斷和做出決策的關鍵技術。研究者將實驗室測試與分子生物學相結合,以提高檢測微生物病原體和分析患者基因的速度和準確性。分子診斷技術可以快速執行基因檢測工作,分離DNA鏈并快速復制數百萬次,甚至數十億次,為醫生提供做出正確診斷和治療決策所必需的基本信息。
聚合酶鏈反應

聚合酶鏈反應(PCR)是分子診斷中常用的一種技術,它將單個DNA拷貝或幾條DNA鏈放大多個數量級,生成數十萬份特定DNA序列。這種方法依賴于熱循環,包括重復加熱和冷卻DNA熔化和DNA酶促復制反應的循環。PCR實驗需要大量的熱循環步驟來產生數千條DNA序列以進行分析。

熱循環

通常,PCR由一系列20到40次重復的溫度變化組成,稱為循環,每次循環使DNA拷貝加倍。在大約40個循環中,可以生成大約10億個DNA拷貝,以生成足夠的生物標記物,其可以通過光學測量系統高精度識別。循環之前通常在高溫(95°C)下進行單一溫度步驟,分離DNA,然后冷卻至50至65°C之間的熔融溫度,生物標記物將與DNA結合,最后將溫度提高到72℃,以便對DNA的拷貝進行檢測。每個階段的設定點溫度和時間長度取決于基于生物標記物附著于DNA程度的各種參數。

熱循環儀

PCR在特殊分子診斷裝置中進行的,也稱為熱循環儀。在熱循環儀中,每個工藝溫度的加熱和冷卻時間需要精確的溫度控制,需要極快的升降溫速率,以最大限度地縮短擴增的總持續時間??刂苽扔煽販啬K組成,以放置樣品孔。

整個熱模塊只能允許最小的溫度梯度,以最大限度地降低整個樣品孔的溫度過沖,這對于使用多孔的自動PCR儀來說是一個挑戰。

PCR儀主要有三種類型:傳統的、實時的和定量的。在90年代設計的傳統PCR儀準確性差、靈敏度低,而且在測試之后才能獲得結果。實時PCR儀允許技術人員在測試過程中查看結果,為定量提供最精確的數據。實時PCR使 POCT檢測成為可能,在較短的時間內向患者提供結果。POC測試確?;颊唠S時隨地獲得最有效的醫療護理。定量分析,即數字PCR,樣本擴增后,對陽性和陰性反應的數目進行精確計數,直接獲得樣品的拷貝數,可以進行比實時PCR更精確的分析。

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